Larry Daley har fått jobb som nattevakt på det naturhistoriske museet. Hans nærmeste sjef advarer han mot at det kan føles litt skummelt i et tomt og mørkt museum, og at han ikke får slippe inn - eller ut - noe som helst. Det ingen kunne vite er at Larry ved en feiltagelse vekker en gammal forbannelse som får usedvanlige følger.