Ditte & Louise er basert på TV-serien med samme navn, hvor skuespillerne Ditte Hansen og Louise Mieritz spiller alternative versjoner av seg selv. Når det går opp for de to middelaldrende kvinnene at de bare får roller som noens mor, tar Ditte en radikal avgjørelse. Hun bestemmer seg for å kle seg ut som mann for å prøve lykken.